La Unidad de Secuenciación y Análisis de Fragmentos pone al servicio de sus clientes las tecnologías más avanzadas en el campo de la secuenciación y genotipado de ADN y ofrece soporte técnico y asesoramiento para aquellos clientes que desean introducir estas técnicas en su campo de trabajo, como apoyo a su investigación en estudios genéticos.
Se disponen de la última generación de equipos de secuenciación automática de ADN lo que permite desarrollar diferentes aproximaciones al análisis del ADN por personal altamente cualificado.
La Unidad de Secuenciación oferta la metodología basada en la reacción química de Sanger y la posterior migración en secuenciadores capilares automáticos.
Funcionamiento del servicio
El usuario interesado puede ponerse en contacto con el personal de la Unidad para solicitar información y/o presupuesto del servicio.
Para solicitar el servicio, es necesario que el usuario envíe por correo electrónico o fax el formulario de solicitud de secuenciación debidamente cubierto.
Análisis de fragmentos
- PCRs marcadas
- Microsatélites
- AFLPs,
- SNPs
Los equipos del servicio permiten a utilización de marcaje con: 6-FAM™, HEX™, VIC®, NED™, PET®, ROX ™ y LIZ ®
Secuenciación de ADN
En esta Unidad se puede determinar la secuencia nucleotídica de muestras utilizando la química BigDye® Terminator v3.1, a partir de:
- ADN clonado en vectores
- Producto de PCR
La Unidad oferta también la posibilidad de realizar directamente a electroforesis de muestras previamente procesadas por el usuario.
El análisis de muestras inferiores o no múltiplos de 96 tendrá un coste mayor si se mantiene el plazo de entrega de 48 horas. En este caso, las tarifas se mantendrán si el plazo de entrega se puede demorar.
Fragmentos
Los fragmentos a analizar en cada pocillo deben venir previamente mezclados, si no se cobrará un coste extra de preparación de la muestra.
Secuencias
Tanto las muestras como los primers deben enviarse perfectamente etiquetados en tubos tipo Eppedorf ® independientes o en placas de 96 pocillos. Hay que intentan que el nombre sea inferior a 8 caracteres y no usar signos de puntuación.
En el caso de productos de PCR purificados por el usuario se enviarán 1,5µl de primer específico a una concentración de 5µM por muestra, e 10 µl de ADN. La concentración recomendada a la que debe estar la muestra puede consultarse en esta tabla:
| Tipo de ADN | Concentración |
|---|---|
| Plásmidos (3-20 kb) | 100 ng/ µl |
| Plásmidos (>20 kb) y cósmidos | 200 ng/ µl |
| Productos de PCR hasta 500 pb | 50 ng/ µl |
*Para otros tipos de ADN consultar
Si los productos de PCR no están purificados debe especificarse, esto supondrá un coste adicional y una demora en la entrega de resultados. Es importante que el usuario se tenga cercionado de la presencia de un único ADN molde.
Si se prevé que la muestra pueda originar dificultades para a su secuenciación, es importante comunicarlo al personal de la unidad para recibir asesoramiento y evaluar el problema.
Las muestras (tubos o placas), junto con el formulario de solicitud de servicio de secuenciación, se enviarán en sobres acolchados por correo postal o mensajería (evitando envíos los viernes y vísperas de festivos) a temperatura ambiente.
Plataforma de Secuenciación y Genómica Funcional
- Edificio de Apoyo a la Investigación (CACTUS)
- Rúa de Constantino Candeira, 1. Campus Vida , 15782Santiago de Compostela